確保充分的細胞生長是細胞培養(yǎng)和收集精-確數(shù)據(jù)的一個關(guān)鍵部分。對于單層生長的細胞，融合度定義為顯微鏡觀察到被一層細胞覆蓋的培養(yǎng)器皿表面積的百分比。比如，50%細胞融合是指一半的培養(yǎng)皿/瓶等的表面被細胞覆蓋。對于懸浮細胞，通常用細胞系或類型的細胞密度衡量其生長過程，但或許也可通過濁度增加和培養(yǎng)基顏色穩(wěn)定評估“融合“。

培養(yǎng)中的細胞生長一般發(fā)生在四個階段，隨著時間推移的細胞計數(shù)的對數(shù)形成一個S型曲線(S-型)，不同細胞系和培養(yǎng)物在每個階段需要的時間有很大差異。

1.停滯期：細胞適應(yīng)培養(yǎng)條件的階段，細胞在此階段不分裂。細胞通常在起始培養(yǎng)后的24小時內(nèi)附著，該階段的總時長取決于培養(yǎng)之初使用細胞的生長階段和接種密度。

2.對數(shù)期：細胞在此階段積極分裂，是評估群體生長和通用數(shù)據(jù)收集的-佳時間。對數(shù)期的后期，過度擁擠導(dǎo)致細胞脅迫之前是傳代細胞(亞培養(yǎng))的-佳時機。

3.平穩(wěn)期：隨著細胞達到100%融合，細胞在此階段生長放緩，不足1/10的細胞處于活躍細胞周期。細胞在此階段容易受傷，因此需要小心觀察以確保細胞在此階段之前或之初進行傳代。

4.衰退期：細胞周期的自然組成部分。在此階段，隨著細胞死亡占據(jù)主導(dǎo)地位，活細胞群體數(shù)量減少。

評估細胞生長

準確的細胞計數(shù)對評估培養(yǎng)的細胞生長是至關(guān)重要，因為錯誤的計數(shù)會導(dǎo)致關(guān)于細胞健康的錯誤結(jié)論。細胞計數(shù)可以使用血球計數(shù)板、自動計數(shù)器進行。

預(yù)防和消除細胞生長問題的常規(guī)技巧和技術(shù)

1.除了遵循良好的無菌操作實踐以防止微生物和化學(xué)污染外，細胞生長問題的早期診斷和處理的關(guān)鍵是對培養(yǎng)物的頻繁觀察和詳細的記錄保存。

2.同樣重要的是需要考慮解決問題-有效的方式是詳細和耗時的尋找細胞生長不佳的罪魁禍首，還是-好簡單地使用新的試劑、儲存液和物資重新開始。

仔細地觀察

為了解決細胞生長問題，必須首先意識到問題的存在。許多生長問題都是微妙的，所以定期、詳細的觀察實驗中所有培養(yǎng)器皿是非常必要的。顯微鏡下的快速評估可能是不夠的，許多特殊的生長模式在細胞固定和染色之前并不明顯。另外，仍需定期檢查培養(yǎng)基和其他試劑是否污染。

精-確記錄

當(dāng)試圖診斷和解決細胞生長不良的問題時，擁有關(guān)于培養(yǎng)各個方面的好筆記可以節(jié)省時間、金錢和珍貴的修飾細胞如敲除細胞系。比如，標準化細胞密度、記錄儲存細胞的傳代次數(shù)對判斷儲存液是否可能為問題來源至關(guān)重要。同樣，在得出某批次培養(yǎng)基是罪魁禍首的結(jié)論之前，必須首先確保哪些培養(yǎng)皿使用了這一批次。

需要記錄的重要信息包括所有凍存管的來源、身-份證明、無污染、傳代次數(shù)、細胞密度、冷凍和儲存方法等。使用的所有試劑的成分和濃度、批號、*打開和使用日期都應(yīng)該記錄下來。所有培養(yǎng)器皿的批號也應(yīng)該記錄。細胞培養(yǎng)個方面的詳細實驗步驟應(yīng)該標準化和遵循，所有凍存管和培養(yǎng)器皿的精-確和詳細標簽都是至關(guān)重要的。注意小細節(jié)，比如培養(yǎng)箱清理和保養(yǎng)的時間、CO2罐更換的時間、培養(yǎng)室后篩查支原體的時間，并記錄任何異常的事件。

知道何時止損

有時，發(fā)現(xiàn)問題的確切來源不像解決它那么重要，因此，立即修復(fù)多個潛在的導(dǎo)致生長不良的原因比嘗試隔離確切的問題更節(jié)約時間和成本。比如，使用新的儲存細胞和所有新的培養(yǎng)基、血清、緩沖液等重新開始，比分別獨立嘗試各物料的新批次直到發(fā)現(xiàn)罪魁禍首更合乎情理。